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影响培养基pH的因素

发布时间:2022-07-29   点击次数:68次

在市场上购买的商品化脱水培养基,大多数厂家已经调整了pH到正确范围内,只需加水溶解后灭菌即可使用,有些培养基因成分原因或受其他因素的影响,导致灭菌后的pH不在范围内,需要进行调整。


培养基pH的规定:

  培养基灭菌前后通常会有变化,大多数培养基以灭菌后的pH为准,《GB4789.28 培养基和试剂的质量要求》中规定,“除特殊说明外,培养基灭菌后冷却至25℃时,pH应在标准pH±0.2范围内。一般使用浓度约为40g/L(约1mol/L)的氢氧化钠溶液或浓度约为36.5g/L(约1mol/L)的盐酸溶液调整培养基的pH。如需灭菌后进行调整,则使用灭菌或除菌的溶液。"


影响培养基pH的因素:

  1.灭菌温度和时间

  市场上售卖的高压蒸汽灭菌锅性能存在差异,灭菌锅整个灭菌过程的持续时间会导致培养基pH的变化不同。特别是对于一些含糖量较高又不含缓冲体系的培养基(如沙氏葡萄糖琼脂、硫乙醇酸盐流体培养基、MRS培养基等)影响更大,一些小型的灭菌锅灭菌较快,培养基中的成分变化较小,灭菌后的培养基pH相对比较稳定,而一些大型灭菌锅或灭菌柜则不相同,整个灭菌过程持续时间比较长,而且受装载量、内部物品分布等因素影响,灭菌后的培养基通常pH会偏低(主要是因为培养基中的糖类成分在高温下会出现焦化现象,温度越高,高温持续时间越久,焦化现象越明显,直观上表现为培养基的pH下降和颜色加深)。因此,在使用大型灭菌锅制备大量培养基时,应预先进行灭菌工艺验证,若灭菌后的pH不正确,可在灭菌前进行调整。

  2.培养基的保温时间

  一些琼脂培养,灭菌后可能不会立即使用,许多人会选择放50℃左右水浴保温,也有些人会选择直接焖在灭菌锅里保温。水浴保温相对影响较小,而灭菌锅的温度相对较高,保温过程易造成培养基内的糖类焦化,导致培养基pH下降。因此,灭完菌的培养基应及时从灭菌锅取出,在50℃左右保温一般不超过4h,可继续使用。

  3.培养基的反复溶化

  已凝固的培养基,再次融化时需要加热处理,相当于增加了培养基的受热时间,复溶次数越多,培养基pH变化越大,同时也会导致琼脂的凝胶强度下降。因此,已凝固的培养基通常只允许复溶一次使用。

  4.培养基的溶解过程

  大多数厂家的培养基标签上都写着灭菌前需进行加热溶解,加热后再进行灭菌的培养基溶解比较均匀,而且有利于灭菌过程中的热穿透,若灭菌前未进行加热灭菌,易导致培养基pH变化不稳,特别是含琼脂的培养基,灭菌前不加热易导致培养基分布不均匀,灭菌不彻底。含碳酸盐的培养基,灭菌前不加热易导致灭菌后的培养基pH偏低。

  5.水质问题

  若配制培养基使用的水质不佳,偏酸或偏碱,或含有一些离子,都有可能会导致培养基的pH出现偏差。

  6.添加成分的影响

  有些培养基在灭菌后需添加一些营养成分增强营养或增加选择性,一些添加剂会对培养基的pH造成较大影响,如L-半胱氨suan盐酸盐酸性较强,加入培养基后会导致pH下降,因此应预先对培养基的pH进行调整,确保加入特定成分后的培养基pH依然在合格范围内。

  7.测量温度

  在标准中规定测定培养基的pH应以25℃为准,大多数没有缓冲体系的营养类培养基pH随着温度降低而升高,测量温度不对时会导测量的pH出现偏差,有些pH计虽然有温度补偿功能,但是这个模式并不能完全适用于培养基的测定,因此必须要在25℃时测定培养基的pH。

  8.pH计的准确度

  受缓冲液的配制、校准过程等各种因素影响,pH计的准确度也会存在误差,这种误差是不可避免的,大多数pH计的厂家认为误差范围应控制在±0.05以内。


培养基pH的调整:

  通常可使用1mol/L的盐酸和氢氧化钠进行调整,也可使用碳酸钠、酒石酸或苹果酸等弱碱弱酸进行调整,有些特殊的培养基,如培养军团菌用的BCYE、GVPC培养基,因钠离子对军团菌生长不利,需要用氢氧化钾进行调整pH。


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