技术文章您现在的位置:首页 > 技术文章 > 大肠菌群的快速检测方法及结果判断

大肠菌群的快速检测方法及结果判断

发布时间:2021-06-30   点击次数:193次

一、大肠菌群简介

 

  大肠菌群是革兰氏阴性、无芽孢、氧化酶阴性的杆状细菌,为需氧和兼性厌氧,可在有胆盐(或具有其他抑制生长的表面活性剂)存在的情况下生长,通常可在36℃士2℃发酵乳糖并产酸和醛。具有β-半乳糖苷酶,在本标准设定的条件下,大肠菌群为能分解β-半乳糖苷,使培养基发出荧光或生成紫色(或红色)菌落。主要由肠杆菌科中四个属内的一些细菌所组成,即埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属以及肠杆菌属。

 

  大肠菌群主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。如果大肠菌群存在于食品中,表明未作有效的消毒处理、加工后保存条件不良或消毒后又受到污染。快速检验这些细菌,有助于食品的卫生管理,维护消费者的食用安全。

二、参考标准

 

  《GBT 4789.32-2002 大肠菌群的快速检测》

 

三、检验原理

 

  3.1 最可能(MPN)法

 

  大肠菌群可产生β-半乳糖苷酶,分解液体培养基中的酶底物—4-甲基伞形酮-β-半乳糖苷(以下简称MUGal),使4-甲基伞形酮游离,因而,在波长366nm的紫外光灯照射下呈现蓝色荧光。

 

  3.2 平板法

 

  大肠菌群可产生β-半乳糖苷酶,分解培养基中的酶底物—茜素-β-D-半乳糖苷(以下简称Aliz-gal),使茜素游离并与固体培养基中的铝、钾、铁、钱离子结合形成紫色(或红色)的鳌合物,使菌落呈现相应的颜色。

 

四、检验方法以及结果分析

 

  大肠菌群快速检验程序见图1。

图1 大肠菌群快速检验程序

 

  4.1 大肠菌群的MPN计数

  4.1.1 检验方法

 

  选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液(液体样品可以选择原液),每个稀释度接种3管MUGal肉汤管,每管接种1mL(如接种量超过1mL,则用双料MUGal肉汤管),同时另取2支MUGal肉汤管(或双料MUGal肉汤管)加入与样品稀释液等量的上述无菌磷酸盐缓冲液(或生理盐水)作空白对照。将接种后的培养管置于37±1℃培养箱培养18h-24h。

 

  将培养管置于暗处,用波长366nm的紫外光灯照射,如显蓝色荧光,为大肠菌群阳性管;如未显蓝色荧光,则为大肠菌群阴性管。

 

  培养基检验原理:胰蛋白胨提供碳源和氮源满足细菌生长的需求;氯化钠可维持均衡的渗透压;月桂基硫酸钠可以抑制革兰氏阳性菌的生长;大肠菌群可产生β-半乳糖苷酶,分解液体培养基中的酶底物4-甲基伞形酮-β-D-半乳糖苷MUGal,使4-甲基伞形酮游离,在波长366nm紫外灯照射下呈现蓝色荧光。

 

  培养基用法:称取本品30.7克,加热搅拌溶解于1000mL蒸馏水中,分装于20mm×150mm试管中,每管9mL,116℃高压灭菌10分钟,待培养基冷却后,以无菌操作于每管培养液内加入0.1mL经无菌水稀释的500ug/mL头孢磺啶液,备用。

 

  质控菌株接种到MUGal肉汤管中,培养结果如下图所示:

 

正常光线下

a:空白对照;b:大肠杆菌;c:产气肠杆菌;d:鼠伤寒沙门氏菌;e:金黄色葡萄球菌

图2

 
366nm紫外灯照射下

a:空白对照;b:大肠杆菌;c:产气肠杆菌;d:鼠伤寒沙门氏菌;e:金黄色葡萄球菌

图3

 

  4.1.2 结果报告

 

  根据大肠菌群阳性管数,通过查MPN表,报告每100mL(g)食品中大肠菌群MPN值。

 

  4.2 大肠菌群的菌落计数

  4.2.1 检验方法

 

  用灭菌吸管吸取待检样液1.0mL,加入无菌平皿内。每个样品接种三个连续稀释度,每个稀释度接种两个平皿。于每个加样平皿内倾注15mL 45~50℃的Aiiz-gal琼脂,迅速轻轻转动平皿,使混合均匀。待琼脂凝固后,再倾注3mL-5mL Aliz-gal琼脂覆盖表面。同时将Aliz-gal琼脂倾人加有1mL上述无菌磷酸盐缓冲液(或生理盐水)的无菌平皿内作空白对照。

 

  待琼脂凝固后,翻转平板,于37±1℃培养箱培养18h-24h。取出平板,计数紫色(或红色)菌落。

 

  培养基检验原理:胰酪胨提供碳氮源、维生素和矿物质满足细菌生长的需求;氯化钠可维持均衡的渗透压;月桂基硫酸钠可抑制革兰氏阳性菌的生长;大肠菌群可产生β-半乳糖苷酶,分解液体培养基中的酶底物茜素-β-D-半乳糖苷(Aliz-gal),使茜素游离并与固体培养基中的铝、钾、铁、钱离子结合形成紫色(或红色)的鳌合物,使菌落呈现相应的颜色。

 

  培养基用法:称取本品46.7g,加热溶解于1000mL蒸馏水中,116℃高压灭菌10分钟,备用。

 

  质控菌株接种到Aliz-gal琼脂中,培养结果如下图所示:

 

  
大肠杆菌ATCC 25922 弗氏柠檬酸杆菌ATCC 43568 鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028

                                                    图4 标准菌株在Aliz-gal琼脂中生长情况

 

  4.2.2 结果报告

  4.2.2.1 当平板上的紫色(或红色)菌落数不高于150个,且其中至少有一个平板紫色((或红色)菌落不少于15个时,按公式1计算大肠菌群数:

  

  公式1:N=∑C/(n1+n2)d

  式中:

  N—样品的大肠菌群数,个/mL或g;

  ΣC—所有计数平板上,紫色(或红色))菌落数之总和;

  n1—供计数的稀释倍数的平板数;

  n2—供计数的高一稀释倍数的平板数;

  d—供计数的样品稀释度(如10-1,10-2,10-3等)。

 

  4.2.2.2 如接种所有(3个)稀释样品的平板上,紫色(或红色)菌落数均少于15个时,仍按式(1)计算,但应在所得结果旁加“*”号,表示为估计值。

  

  4.2.2.3 如接种未稀释样品和所有稀释样品的平板上,紫色(或红色)菌落数均少于15个时,报告结果为:每毫升(克)样品少于15个大肠菌群。

  

  4.2.2.4 如接种未稀释样品和所有稀释样品的平板上,均未发现紫色(或红色)菌落数时,报告结果为:每毫升(克)样品少于1个大肠菌群。

 

  4.2.2.5 如平板上的紫色(或红色)菌落数高于150个时,按式(1)计算,在结果旁加“*”号表示估计值或视情况重新选择较高的稀释倍数进行测定。

 

  注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。

青岛高科技工业园海博生物有限公司

青岛高科技工业园海博生物有限公司

地址:青岛市高新区锦汇路1号A2栋

© 2021 版权所有:青岛高科技工业园海博生物有限公司  备案号:  总访问量:35571  站点地图  技术支持:化工仪器网  管理登陆

QQ在线客服
联系方式

15192782913

86-0532-81935226