技术文章您现在的位置:首页 > 技术文章 > 干粉培养基煮沸灭菌的操作方法及注意事项

干粉培养基煮沸灭菌的操作方法及注意事项

发布时间:2021-05-12   点击次数:463次

一、灭菌方法简介

 

  培养基在使用之前必须进行灭菌处理,将其所含活菌全部杀死或全部除去。常用的灭菌方法有过滤除菌、干热灭菌、湿热灭菌及辐照灭菌等。其中,湿热灭菌法又包括四种方式:煮沸法、流动蒸汽灭菌法、间歇灭菌法和压力蒸汽灭菌法。通常来说,使用比较多的是压力蒸汽灭菌法。

  但是对于有些培养基来说,高压条件会损坏培养基中的某些成分,不利于培养基的使用,所以只能采用煮沸灭菌的处理方法。本文主要就煮沸灭菌方法进行讨论。

 

二、煮沸灭菌的常见表述

 

  有关煮沸灭菌的描述,通常有如下几种方式:

 

  a、称取本品41.5g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,煮沸不要超过2分钟。无需高压灭菌。临用时制备,不得超过3小时。

 

  b、称取本品50.3g,加入1000ml蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解,冷至45-50℃,摇匀,倾入无菌平皿备用。无需高压灭菌。

 

  c、称取本品89g,煮沸溶解于1000ml蒸馏水中,冷至45-50℃时,倾入无菌平皿,备用。注:无需高压灭菌。

 

  d、称取本品57g,加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中,不要过分加热,冷至50-55℃时,倾入无菌平皿,部分开盖干燥2h,然后盖上,备用。无需高压灭菌。在 24小时内使用。

 

  这些方法描述中,都特别强调“无需高压灭菌”、“不要过分加热”、“煮沸充分溶解”,那么究竟该怎样操作,才能达到既灭菌完全又尽量降低对培养基的破坏呢?

 

三、煮沸灭菌的实际操作

 

  1、关于煮沸方式,有人提出可以隔水煮沸,但经过反复试验,发现这种煮沸方式存在两大弊端:①温度不够,达不到灭菌效果;②经隔水煮沸的含琼脂培养基,在水浴的过程中易出现分层现象。

 

  2、为了对培养基进行有效煮沸灭菌,根据我们实践摸索,建议如下操作:

 

  ①准备好电磁炉和搪瓷缸(不要用铁质容器);

  ②将培养基按比例加水,称量至搪瓷缸中,用玻璃棒不断搅拌,直至完全溶解、无明显团状物或颗粒;

  ③将搪瓷缸置于电磁炉上,大火烧开,期间持续搅拌,避免糊底;当液面完全沸腾后,立即将搪瓷缸从电磁炉上拿开,算是一次煮沸操作;液面回落后,立即放回电磁炉,重复上面的步骤;总共煮沸3次即可。

  ④将煮好的培养基冷却至需要的温度,进行倾注平皿等操作。

 

四、注意事项

 

  1、补水

 

  加热煮沸的过程,培养基中的部分水分会蒸发掉,造成水分偏少,影响培养基的质量(如平板强度等),导致菌落形态等结果的偏差,因此为了尽量减少误差,需要在煮沸之前,向搪瓷缸中补加适量培养基配制用水,经验估计,通常每煮一缸培养基需补加15-20ml水,实际操作中,需根据各实验室的具体情况(容器大小及装量)进行摸索。

 

  2、溶解

 

  所有的培养基,在煮之前必须搅拌至完全溶解,不允许将尚有成团培养基的状态下,直接进行加热煮沸,那样很容易出现灭菌不彻底的现象,尤其是有些含琼脂的培养基,甚至会有部分琼脂不能彻底溶解,导致倒出的平皿上有明显的麸皮状琼脂小颗粒,或者有些含有染料的培养基也可能出现染料颗粒,都会影响培养基的使用(所述各种情况见下图)。

 

  正确操作:

                             

  

  错误操作:

                              

 

  平板上出现未完全融化的琼脂颗粒:

                                   

 

  3、搅拌

 

  煮沸全程必须持续不断搅拌,以免糊底。

 

  4、防烫

 

  液面沸腾后,要及时将搪瓷缸从电磁炉上取下,以免液体沸出,造成培养基沾染或烫伤操作人员。

青岛高科技工业园海博生物有限公司

青岛高科技工业园海博生物有限公司

地址:青岛市高新区锦汇路1号A2栋

© 2022 版权所有:青岛高科技工业园海博生物有限公司  备案号:  总访问量:38802  站点地图  技术支持:化工仪器网  管理登陆

QQ在线客服
联系方式

15192782913

86-0532-81935226