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甲苯胺蓝-DNA酶琼脂的简单介绍

发布时间:2021-01-08   点击次数:250次

一、培养基用途

 

  用于金黄色葡萄球菌耐热核酸酶的检测。金黄色葡萄球菌是引起人、畜患病的常见的病原体之一,同时也是食品等检验标准的重要监测病原体之一。而耐热核酸酶是产肠毒素金黄色葡萄球菌生长的一个典型特征,是检测金黄色葡萄球菌污染的标志特征之一。

 

二、培养基成分及使用方法

 

  1、培养基成分

  

成分含量(g/1000ml)
脱氧核糖核酸(DNA)0.3
氯化钙1.1
氯化钙10.0
三羟甲基氨基甲烷6.1
琼脂10.0
pH 9.0±0.125℃

 

2.使用方法

 

称取本品 27.58g,加热溶解于1000ml蒸馏水中,煮沸溶解后冷却至合适温度,倾入无菌平板。

 

三、实验原理

 

  产肠毒素的金黄色葡萄球菌可产生胞外热稳定DNA酶,在沸水中水浴15min后仍可保持活性,水解DNA长链形成数个单核苷酸组成的寡核苷酸链,使甲苯胺蓝由蓝色变成粉红色;氯化钙提供阳离子作为激活剂;氯化钠维持均衡的渗透压;三羟甲基氨基甲烷为缓冲剂;琼脂为培养基的凝固剂。

 

四、实验方法及结果

 

  1、按使用方法制备培养基,在琼脂上打成直径2mm的小孔,抽出小孔中的琼脂。

 

  2、每个小孔加入约0.01ml水浴处理(在水浴中煮沸15min)后的可疑菌的肉汤培养物。

 

  3、将平板正置于培养箱中,36℃±0.1培养4小时。阳性反应为在小孔周围形成至少扩展约1mm的粉红色的晕圈。

 

  4、金黄色葡萄球菌有粉红色晕圈,如图1-a、1-b所示;大肠埃希氏菌无粉红色晕圈,如图1-c所示。

 

a: 金黄色葡萄球菌ATCC6538,b: 金黄色葡萄球菌ATCC25923,c: 大肠埃希氏菌ATCC25922

图1 甲苯胺蓝-DNA琼脂的微生物结果

 

 

五、注意事项

 

  1、配置培养基时,如不能立即使用可分装三角瓶,121℃高压灭菌15min,灭菌后的培养基可于室温存放4个月无变化。使用时加热融化倾注平板,此培养基经数次融化后仍可使用。

 

  2、每个平板打孔数量可根据实际情况增减,但需预留出晕圈范围,以防打孔位置过近影响阴阳性判断。

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