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实验室常用灭菌方式介绍及应用

发布时间:2020-12-23   点击次数:797次

一、干热灭菌

 

  常用于耐热器皿的灭菌,如移液管、玻璃平皿、玻璃试管或金属器皿等,可在170℃灭菌2-4h或200℃灭菌0.5-1h。接种环、接种针、涂布棒等实验器材可在酒精灯上直接进行灼烧灭菌。

  灭菌效果:灭菌效果强,可杀灭包括芽孢在内的所有微生物。

  注意事项:

  1.干热灭菌过程的热穿透效果差且比较慢,因此在烘箱内进行干热灭菌时,不可摆放过满;

  2.塑料、橡胶等不耐热材质不可采用此方法灭菌;纸张、棉花灭菌温度不能超过170℃;

  3.制备好的培养基不可采用此方法灭菌。

 

二、高压蒸汽灭菌(湿热灭菌)

 

  常用于实验室多数培养基灭菌,也可用于玻璃器皿、金属器皿的灭菌。一般采用121℃高压灭菌15-20min或116℃高压灭菌30min,根据培养基不同可对灭菌参数进行调整。

  灭菌效果:可杀灭包括芽孢在内的所有微生物。

  注意事项:

  1.灭菌锅效力不达标、灭菌过程冷空气未排净、培养基本身含芽孢过多、灭菌方式不正确、灭菌锅内物品摆放过满都有可能导致灭菌失败;

  2.在进行容器灭菌时,容器不可密封,需与灭菌锅内空气流通。

 

三、水浴/加热/流动蒸汽灭菌

 

  常用于含不耐热成分的培养基灭菌,如XLD琼脂、亚//硒酸盐胱氨酸增菌液、亚硫酸铋琼脂等。采用流动蒸汽方式灭菌的培养基,如没有相应的流动蒸汽灭菌设备,可采用水浴加热方式或“蒸”的方式灭菌。

  灭菌效果:可杀灭微生物繁殖体,不能杀灭芽孢体,采用此类方式灭菌的培养基通常具有强抑菌性,或要求短时间内使用。

  注意事项:

  1.不同培养基成分耐热性有差别,加热时应当注意,如含亚//硒酸盐的培养基(SC、SBG等)加热至90℃左右即可,加热过度会使亚硒//酸氢钠分解,培养基变红;含琼脂的培养基可加热煮沸4-6次或沸水浴20-30min使琼脂完全溶解即可;

  2.采用加热灭菌方式的培养基,通常含有不稳定成分,建议现配现用或按标准规定的期限使用,如不立即使用,可置于低温或阴凉(2-8℃或10-20℃)处避光保存。

 

四、过滤除菌

 

  常用于抗生素或含不耐热成分培养基的灭菌,一般使用0.22μm孔径的微孔滤膜或滤芯进行过滤除菌。实验室制取无菌空气也可采用此方法,使用特殊滤芯或滤网对空气进行过滤除菌。

  灭菌效果:可除去普通细菌、真菌及芽孢体,但不能除去支原体、病毒等体积微小生物。

  注意事项:

  1.使用前通常需按照说明书使滤膜或滤芯浸湿;

  2.注意过滤速度和体积,需严格按照过滤器或滤膜说明使用,速度过快或过滤体积超标都有可能导致滤膜破损,除菌失败;

  3.黏度较大或有沉淀的培养基不适合用此方式除菌。

 

五、辐照灭菌

 

  微波、紫外线、X射线和γ射线等均可用于灭菌。γ射线穿透力强,灭菌效果好,被广泛应用于食品、药品行业产品灭菌,也常用于微生物培养基、实验器材灭菌。一些特殊培养基或添加剂成分因不适合高温蒸汽灭菌、过滤除菌等方法,可采用γ射线辐照灭菌。紫外线杀菌效果较弱,几乎没有穿透力,通常仅用于实验室空气或物体表面杀菌。

  灭菌效果:γ射线灭菌效果好,穿透力强,可杀死包括芽孢体在内的所有微生物。

  注意事项:

  1.并非所有培养基都可以采用γ射线辐照灭菌方式,一些染料或不稳定成分经辐照后会发生变化;

  2.γ射线会对琼脂造成一定程度破坏,因此在进行固体培养基灭菌时,需对辐照剂量和琼脂添加量进行适当调整;

  3.玻璃制品、金属制品一般不可采用此方法灭菌。

 

六、化学试剂灭菌

 

  常用环氧乙烷灭菌,以及各类消毒剂浸泡灭菌。环氧乙烷曾广泛用于平皿、一次性医疗产品的灭菌,但由于对环境污染较大,灭过菌的产品需长时间放置使环氧乙烷消散,现已逐步被其他灭菌方式取代。

  灭菌效果:不同消毒剂杀灭效果存在差异,大致上可分为低效消毒剂、中效消毒剂和高效消毒剂。环氧乙烷属于高效消毒剂,可杀灭包含芽孢在内的所有微生物。

  注意事项:

  1.此类灭菌方式通常会有残留,且对环境有污染,因此一般不适合用于直接进行微生物培养相关器皿灭菌;

  2.杀菌能力越强的消毒剂,刺激性、腐蚀性、毒性往往越大,使用时需注意防护。

                                                              

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